Аутоиммунные заболевания в организме человека
Аутоиммунные заболевания в организме человека возникают, когда организм начинает подвергаться разнообразной атаке собственных антител. В наше время есть ряд различных лабораторных исследований для проведения их диагностики. Иммунные реакции, включая производство антител, в норме развиваются только против чужеродных антигенов (веществ, которые организм воспринимает как потенциально опасные), таких как бактерии и вирусы. Организм обычно не реагирует на собственные антигены.
Аутоиммунная реакция
По причинам, которые еще не до конца изучены, примерно у 5% людей иммунная система начинает производство антител к собственным белкам. Эта аномальная реакция приводит к аутоиммунным заболеваниям, таким как ревматоидный артрит, системный васкулит, рассеянный склероз и сахарный диабет 1-го типа (инсулинозависимый). Существует целый ряд лабораторных исследований, проводимых пациентам с клиническими симптомами, позволяющими заподозрить аутоиммунное заболевание. Однако иммунодиагностика для постановки диагноза часто не требуется. Например, при диабете 1-го типа диагноз может быть поставлен на основании определения уровня глюкозы в крови натощак.
При многих аутоиммунных заболеваниях выявление аутоантител (производимых против собственных белков) используется в качестве вспомогательного способа диагностики. Для этого проводится анализ крови. Для выявления аутоантител образец крови центрифугируется (обрабатывается в специальном аппарате, который разделяет частицы различной плотности на слои). При этом сыворотка, содержащая антитела, отделяется от кровяных клеток. Для выявления аутоантител в сыворотке крови используется несколько различных методов. Титром называют предельное разведение пробы сыворотки крови, при котором антитела все еще определяются. Относительно малое количество аутоантител (титр примерно 1:10) часто встречается у здоровых людей и не считается опасным.
Одним из простейших методов исследования является реакция латекс-агглютинации. С ее помощью определяется способность сыворотки пациента агглютинировать (склеивать) малые гранулы полистирольного латекса, покрытые собственными антигенами. При добавлении сыворотки крови аутоантитела против собственных молекул склеиваются и выпадают в осадок (агглютанируют). Реакция латекс-агглютинации используется для определения определенного типа аутоантител, называемых ревматоидным фактором, характерных для ревматоидного артрита. Они атакуют другие антитела, в особенности иммуноглобулины класса IgG, и, следовательно, могут быть обнаружены путем применения латексных гранул, покрытых подогретыми антителами IgG.
Растворы сыворотки больного и латексных гранул смешиваются на предметном стекле и затем исследуются на предмет агглютинации. Титры антител 1:80 и выше, как правило, считаются клинически значимыми. Данный анализ проводится для подтверждения диагноза ревматоидного артрита у пациентов с соответствующими клиническими симптомами, однако сам по себе он не является достаточно достоверным, так как ревматоидный фактор может присутствовать в крови и при других заболеваниях. При иммуноферментном анализе (ИФА) используется фермент, который вызывает изменение цвета в растворе. Этот тест проводится для выявления аутоантител при ряде аутоиммунных заболеваний. Собственные антигены наносятся на 96-луночный титра-ционный микропланшет. Сыворотка крови пациента добавляется в лунки и оставляется на один час, в течение которого происходит связывание аутоантител с собственными антигенами.
Микропланшет промывается, после чего на нем остаются только аутоантитела, а все другие антитела удаляются. Наличие аутоантител выявляется с помощью специальных вторичных антител, которые связываются с человеческими аутоантителами с присоединением фермента. Вторичное антитело добавляется в каждую лунку. При последующем промывании свободные вторичные антитела удаляются. В лунках остаются лишь антитела, связанные с человеческими аутоантителами, прореагировавшими с собственными антигенами, а также прикрепленные к ним ферменты. При добавлении вещества, вступающего во взаимодействие с ферментом, наблюдается изменение окраски, и тест считается положительным. Чем интенсивнее цвет, тем больше аутоиммунных антител присутствует в данном растворе сыворотки крови.
Вторичные антитела используются в иммунологических тестах для обнаружения человеческих аутоантител. Они производятся путем иммунизации животных, например овец, человеческими антителами. Иммунная система овец реагирует на это путем образования овечьих антител против антител человека. Они очищаются от овечьей крови, а затем помечаются молекулой, например ферментом или флюоресцентным красителем, что позволяет их обнаружить. Третий широко применяемый тип исследования основан на методе иммунофлюоресценции. Образцы сыворотки крови пациента добавляются на тонкие срезы тканей нормальных органов на предметном стекле.
Затем стекло вновь промывают, чтобы удалить свободные вторичные антитела, и исследуют с помощью специального флуоресцентного микроскопа с целью выявления аутоантител. Метод иммунофлюоресцен-ции позволяет одновременно помещать на предметное стекло срезы нескольких различных тканей (например, сердца, почек и щитовидной железы). За этим первоначальным скринингом при необходимости могут последовать более детальные тесты, например ИФА, который позволяет идентифицировать отдельные антигены.